Pencemaran kultur sel dengan mudah boleh menjadi masalah yang paling biasa dalam makmal kultur sel, kadangkala menyebabkan akibat yang sangat serius.Bahan cemar kultur sel boleh dibahagikan kepada dua kategori, bahan cemar kimia seperti kekotoran sederhana, serum dan air, endotoksin, pemplastis dan detergen, dan bahan cemar biologi seperti bakteria, acuan, yis, virus, jangkitan silang mycoplasmas.Tercemar oleh saluran sel lain.Walaupun adalah mustahil untuk menghapuskan sepenuhnya pencemaran, kekerapan dan keterukannya boleh dikurangkan dengan memahami sumbernya secara menyeluruh dan mengikuti teknik aseptik yang baik.
1. Bahagian ini menggariskan jenis utama pencemaran biologi:
Pencemaran bakteria
Pencemaran kulat dan virus
Pencemaran Mycoplasma
Pencemaran yis
1.1 Pencemaran bakteria
Bakteria ialah sekumpulan besar mikroorganisma bersel tunggal di mana-mana.Ia biasanya hanya beberapa mikron diameter dan boleh datang dalam pelbagai bentuk, daripada sfera kepada rod dan lingkaran.Oleh kerana kewujudan, saiz, dan kadar pertumbuhan pesatnya, bakteria, bersama-sama dengan yis dan acuan, adalah bahan cemar biologi yang paling biasa dalam kultur sel.
1.1.1 Pengesanan Pencemaran Bakteria
Pencemaran bakteria mudah dikesan melalui pemeriksaan visual kultur dalam masa beberapa hari selepas ia dijangkiti;
Kultur yang dijangkiti biasanya kelihatan keruh (iaitu, keruh), kadangkala dengan lapisan nipis di permukaan.
Penurunan mendadak dalam pH medium kultur juga kerap ditemui.
Di bawah mikroskop berkuasa rendah, bakteria kelihatan sebagai butiran kecil yang bergerak di antara sel, dan pemerhatian di bawah mikroskop berkuasa tinggi boleh menyelesaikan bentuk bakteria individu.
1.2 Pencemaran kulat & Virus
1.2.1 Pencemaran Acuan
Acuan adalah mikroorganisma eukariotik dari kerajaan kulat yang tumbuh dalam bentuk filamen multiselular yang dipanggil hifa.Rangkaian penghubung filamen multisel ini mengandungi nukleus yang serupa secara genetik yang dipanggil koloni atau miselium.
Sama seperti pencemaran yis, pH kultur kekal stabil semasa fasa awal pencemaran dan kemudian meningkat dengan cepat apabila kultur menjadi lebih teruk dijangkiti dan menjadi keruh.Di bawah mikroskop, miselium biasanya berfilamen, kadangkala sebagai gugusan spora yang padat.Spora banyak acuan boleh hidup dalam persekitaran yang sangat keras dan tidak mesra semasa fasa tidak aktif dan diaktifkan hanya apabila keadaan pertumbuhan yang betul ditemui.
1.2.2 Pencemaran Virus
Virus ialah agen berjangkit mikroskopik yang mengambil alih jentera sel perumah untuk pembiakan.Saiznya yang sangat kecil menjadikannya sukar untuk dikesan dalam kultur dan dikeluarkan daripada reagen yang digunakan dalam makmal kultur sel.Oleh kerana kebanyakan virus mempunyai keperluan yang sangat ketat untuk perumahnya, ia biasanya tidak menjejaskan kultur sel spesies selain perumah.
Walau bagaimanapun, penggunaan kultur sel yang dijangkiti virus boleh menimbulkan risiko yang serius kepada kesihatan kakitangan makmal, terutamanya jika sel manusia atau primat ditanam di makmal.
Jangkitan virus dalam kultur sel boleh dikesan oleh mikroskop elektron, imunostaining dengan set antibodi, ELISA, atau PCR dengan primer virus yang sesuai.
1.3 Pencemaran Mycoplasma
Mycoplasmas adalah bakteria ringkas tanpa dinding sel, dan mereka dianggap sebagai organisma replikasi diri terkecil.Oleh kerana saiznya yang sangat kecil (biasanya kurang daripada 1 mikron), mikoplasma sukar dikesan sehingga ia mencapai ketumpatan yang sangat tinggi dan menyebabkan kultur sel merosot;Sehingga itu, biasanya tiada tanda jangkitan yang jelas.
1.3.1 Pengesanan pencemaran mycoplasma
Sesetengah mikoplasma yang tumbuh perlahan mungkin kekal dalam kultur tanpa menyebabkan kematian sel, tetapi ia mengubah tingkah laku dan metabolisme sel perumah dalam kultur.
Jangkitan mycoplasma kronik mungkin dicirikan oleh pengurangan kadar percambahan sel, penurunan ketumpatan tepu dan aglutinasi dalam budaya ampaian.
Walau bagaimanapun, satu-satunya cara yang boleh dipercayai untuk mengesan pencemaran mikoplasma adalah dengan menguji budaya secara kerap menggunakan pewarnaan pendarfluor (cth, Hoechst 33258), ELISA, PCR, pewarnaan imun, autoradiografi atau ujian mikrob.
1.4Pencemaran yis
Ragi ialah eukariota bersel tunggal dari kerajaan kulat, dengan saiz dari beberapa mikron (biasanya) hingga 40 mikron (jarang-jarang).
1.4.1Pengesanan pencemaran yis
Seperti pencemaran bakteria, kultur yang tercemar dengan yis boleh menjadi keruh, terutamanya jika pencemaran berada di peringkat lanjut.pH kultur yang tercemar dengan yis berubah sangat sedikit sehingga pencemaran menjadi lebih teruk, di mana peringkat pH biasanya meningkat.Di bawah mikroskop, yis kelihatan sebagai zarah ovoid atau sfera individu dan mungkin menghasilkan zarah yang lebih kecil.
2. Jangkitan silang
Walaupun tidak sebiasa pencemaran mikrob, pencemaran silang yang meluas bagi banyak garisan sel dengan HeLa dan saluran sel lain yang berkembang pesat adalah masalah yang jelas dengan akibat yang serius.Dapatkan talian sel daripada bank sel yang bereputasi, semak ciri-ciri garisan sel secara kerap, dan gunakan teknik aseptik yang baik.Amalan ini akan membantu anda mengelakkan pencemaran silang.Cap jari DNA, karyotyping dan isotyping boleh mengesahkan sama ada terdapat pencemaran silang dalam budaya sel anda.
Walaupun tidak sebiasa pencemaran mikrob, pencemaran silang yang meluas bagi banyak garisan sel dengan HeLa dan saluran sel lain yang berkembang pesat adalah masalah yang jelas dengan akibat yang serius.Dapatkan talian sel daripada bank sel yang bereputasi, semak ciri-ciri garisan sel secara kerap, dan gunakan teknik aseptik yang baik.Amalan ini akan membantu anda mengelakkan pencemaran silang.Cap jari DNA, karyotyping dan isotyping boleh mengesahkan sama ada terdapat pencemaran silang dalam budaya sel anda.
Masa siaran: Feb-01-2023